పరమాణు జీవశాస్త్రంలో, మంచి బఫర్ ఎంపిక మరియు వివిధ డిఎన్ఏ ఏకాంత దశల తయారీకి ప్రోటీన్ వ్యక్తీకరణకు కదిలే లేదా ప్రారంభించడానికి మరొక మ్యాక్సీ-ప్రేప్ కిట్ను తెరవడం మధ్య తేడా ఉంటుంది. వారి కీలకమైన ప్రాముఖ్యత ఉన్నప్పటికీ, బఫర్ వంటకాలు తరచూ కేవలం వివిధ వంటకాలకు వివరణ లేదా హేతుబద్ధత లేకుండా రాసిన వంటకాలు. అటువంటి బఫర్ గ్లూకోజ్-ట్రీస్-EDTA లేదా GTE బఫర్.
$config[code] not foundGTE వాడినది ఏమిటి?
LTE (లైట్లు తెరిచి) కణాలు మరియు లోపల ప్లాస్మిడ్ DNA ను పెంపకం చేసే ముందు బ్యాక్టీరియల్ సెల్ గుళికలను పునఃప్రారంభించడానికి GTE ఉపయోగించబడుతుంది. కణ త్వచాన్ని మృదువుగా చేసే లైసోజైమ్, తరచూ GTE బఫర్తో జతచేయబడుతుంది. ఈ కింది సమయంలో మొత్తం కణాల సజాతీయ సస్పెన్షన్ను సాధించడం, తద్వారా జోడించిన కణాల పరిష్కారం కణాలన్నిటికి మంచిది పొందడం మంచి DNA దిగుబడి పొందడానికి కీ. DNA కోసం స్థిరమైన పర్యావరణాన్ని అందిస్తున్నప్పుడు GTE దీన్ని రూపొందించడానికి రూపొందించబడింది.
ఓస్మోలరిటీ కోసం గ్లూకోస్
50mM (మిల్లీమోలార్) గ్లూకోజ్ షుగర్ GTE బఫర్కు జోడిస్తుంది, ఇది osmolarity ను నిర్వహించడానికి కణాలు బయట ఉన్న ద్రావణ ఏకాగ్రత కణాలు లోపల దగ్గరగా ఉంటుంది. ఇది అకాల కణాల నిర్మూలనను నిరోధిస్తుంది, ఇది అగ్రిగేషన్ మరియు అధోకరణం కారణంగా తక్కువ DNA దిగుబడిని కలిగించవచ్చు. బఫర్ యొక్క ఇతర భాగాలు కూడా పరిష్కారం యొక్క ఒస్మోలారిటీకి దోహదం చేస్తాయి, కాని గ్లూకోజ్, ఒక నాన్-ఎలక్ట్రోలైట్గా ఉండటం, ఇది మంచి ఎంపిక, ఎందుకంటే ఇది పరిష్కారం యొక్క బఫర్ లక్షణాలతో జోక్యం చేసుకోదు.
PH స్టెబిలిటీ కోసం త్రిస్
ట్రైస్ (హైడ్రాక్సిమ్థైల్) అమినోమీథేన్ అనే చిన్న పేరు, ఇది చాలా సాధారణ pH బఫర్. GTE బఫర్ విషయంలో, యాసిడ్ ఉప్పు (టిరిస్- HCl) 25mM గాఢత వద్ద బఫర్కు జోడించబడుతుంది. ఈ ద్రావణం యొక్క pH ను సమీప-శారీరక 8.0 వద్ద, ప్లాస్మిడ్ DNA యొక్క ఆమ్ల జలవిశ్లేషణ (అధోకరణం) మరియు ఇతర కణ భాగాల అవాంఛిత పక్కల ప్రతిచర్యలను నివారించడానికి ఆదర్శవంతమైన pH ని నిర్వహిస్తుంది.
EDTA DNA తీర్మానం నిరోధిస్తుంది
EDTA, లేదా ethylenediaminetetraacetic ఆమ్లం, సంగ్రహించడం లేదా "చెలాయిస్" లాంటి అయానుల నుండి పరిష్కారం అవ్వకుండా, వాటిని అవాంఛిత సైడ్ రియాక్షన్లలో పాల్గొనకుండా నివారించడం. GTE బఫర్లో, EDTA 10mM వద్ద జోడించబడుతుంది. దీని ప్రాథమిక ప్రయోజనం బంధంలో ఉచిత జింక్, మెగ్నీషియం, మరియు కాల్షియం వంటివి ఉంటాయి, తద్వారా ఆ లోహాలను అవసరమైన కొన్ని మార్గాల్లో DNA అధోకరణాన్ని నివారించడం.
కొన్ని ముఖ్యమైన చిట్కాలు
మీ GTE బఫర్ చల్లని ఉంచండి మరియు అది అనాలోచిత బ్యాక్టీరియా అభివృద్ధి నిరోధించడానికి చిన్న పరిమాణంలో తయారు. చక్కెర మరియు నియంత్రిత pH గొప్ప పెరుగుదల మీడియం కోసం తయారు. ఎల్లప్పుడూ శుద్ధి చేయబడిన నీటిని వాడండి. పైపుల నుండి లోహపు అయాన్ల కంటే ఎక్కువ కుళాయి నీటిని కలిగి ఉండవచ్చు, ఇది EDTA యొక్క సంగ్రహాన్ని సంగ్రహించడానికి వీలు కల్పిస్తుంది. మీరు మీ నమూనాలో RNA జోక్యం ఉనికిని అనుమానించినట్లయితే, సమస్యను తొలగించడానికి మీ GTE బఫర్కు మిల్లిలైటర్కు 100 మైక్రోగ్రాముల వద్ద RNase A ను జోడించండి.
